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人类风湿因子IgD(RF IgD)定量检测试剂盒

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品牌: Lonto
单价: 4500.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 10000 盒
发货期限: 自买家付款之日起 1 天内发货
所在地: 中国 福建 泉州市
有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-11-28 10:29
浏览次数: 77
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
 Lonto® ELISA

 

仅供科研使用,不得用于临床诊断

 

人类风湿因子IgD(RF IgD)定量检测试剂盒(ELISA)

 

货号:LFS-002

 

 

 

定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液中人类风湿因子IgD(RF IgD)的浓度。

 

 

 

使用试剂盒前,必须仔细阅读本说明书。

 

中国 | 泉州市蓝图生物科技有限公司

福建省泉州市泉港区界山镇蓝图生物科技园A栋5层

TEL: +86 (595) 27926085    FAX: +86 (595) 27973666

E-MAIL: 355902222@qq.com   Phone:13559590085

WEB: http://www.lontogroup.com/

简介

类风湿关节炎(RA)是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症,经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性,可以导致关节畸形及功能丧失。

RA的发病可能与遗传、感染、性激素等有关。RA关节炎的病理主要有滑膜衬里细胞增生、间质大量炎性细胞浸润,以及微血管的新生、血管翳的形成及软骨和骨组织的破坏等。

类风湿关节炎治疗的主要目的在于减轻关节炎症反应,抑制病变发展及不可逆骨质破坏,尽可能保护关节和肌肉的功能,最终达到病情完全缓解或低疾病活动度的目标。

    自身抗体类风湿因子(RF-IgM)、抗环状瓜氨酸(CCP)抗体、类风湿因子IgG及IgA、抗核周因子、抗角蛋白抗体,以及抗核抗体、抗ENA抗体等。

 

实验原理

本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被热凝集兔IgG(固相抗原)的微孔酶标板中,加入校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗人免疫球蛋白D(IgD)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人类风湿因子IgD(RF IgD)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中人类风湿因子IgD(RF IgD)的浓度。

 

试剂盒限制性

1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排出该因素。

7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

 

技术提示

1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

4、使用自动洗板机时,加入一个30秒浸泡的步骤,可以提高检测精度。

5、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

7、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

8、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

 

试剂盒组分与保存

未开封的试剂盒保存在2-8度,不得使用过期试剂盒。

组分

数量

主要成分

开封后储存

校准品

0.5ml/管

******

2-8℃1天

包被微孔板

96T

预包被固相抗原

2-8℃14天

HRP标记抗体

6mL

HRP标记的检测抗体

2-8℃180天

底物液A

6mL

0.01%过氧化氢

2-8℃180天

底物液B

6mL

0.1%TMB

2-8℃180天

30×浓缩洗涤液

20mL

0.05%Tween20

2-8℃180天

说明书

1份

--

--

自封袋

1个

--

--

不干胶

2片

--

--

 

其他用品

1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、质控品(可从蓝图生物科技产品研发系统中选择)

 

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。

4、戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。

 

样品的采集和储存

以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。

样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。

 

试剂准备

1、使用前,所有的组分都要至少复温30min,确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:30稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加29份的蒸馏水。

3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1体积充分混合,混合后15分钟内使用。

 

操作程序

所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。

1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。

2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

3、设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

4、样本孔加待测样本50μL。

5、除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL。

6、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育120min。

7、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复5次。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡30s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。

8、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

9、所有孔加入终止液50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。

 

结果计算

以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD值)作为横坐标,利用计算机软件,采用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。

如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的最终浓度。

 

试剂盒性能指标

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。

2、剂量反应曲线线性

校准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

3、精密度

批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

4、灵敏度

最低检出剂量小于******。

5、回收率

三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次在同一个板块内回收率评估,回收率在85%-115%之间。

6、样本值

1524例健康志愿者血清和血浆样品进行测定,所有的样品测量小于****。

7、特异性

本试剂盒识别天然和重组人类风湿因子IgD(RF IgD),与结构类似物无交叉。

8、稳定性

    2℃-8℃保存,有效期6个月。

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