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小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)定量检测试剂盒(ELISA)

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品牌: 黄石市蓝图生物科技有限公司
货号: LT4040301
单价: 1800.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 120 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 中国 湖北 黄石市
有效期至: 2019-05-06 [已过期]
最后更新: 2018-11-23 15:42
浏览次数: 39
公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

【产品名称】

通用名称:小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)定量检测试剂盒(ELISA

英文名称:Mouse  Tumor necrosis factor α (TNFα) ELISA KIT


【包装规格】

48人份/盒,96人份/


【预期用途】

仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。


【检验原理】

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)抗体(固相抗体,货号:LT4040301C)的微孔酶标板中,加入小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)标准品(货号:LT4040301J)、待测样本和生物素化的检测抗体(货号:LT4040301K)。经过孵育,样本中存在的 小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)与固相抗体和检测抗体结合。经过洗涤去除未结合的组分,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP),在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液作用下,最终转化为黄色。在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度正相关。拟合标准品曲线,可以计算出样本中小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。



【主要组成成分】

主要成分

组分

48T规格

96T规格

标准品

1 vial

2 vial

预包被酶标板

96T

48T

检测抗体

1 vial

1 vial

标准品稀释液

5 ml

5 ml

HRP标记的链霉亲和素

1vial

1vial

10×检测缓冲液

5 ml

5 ml

显色底物 TMB

10 ml

10 ml

终止液

10 ml

10 ml

20×浓缩洗涤液

30mL

30mL

说明书

1

1

自封袋

1

1

封板膜

3

3


需要但未提供的材料及耗材

1、能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪,参考波长 570 nm 630 nm

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水或去离子水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、1L量筒

7、无粉一次性乳胶手套

8、稀释用聚丙烯试管


【储存条件及有效期】

1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。

2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为28天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。


【适用仪器】

半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。


【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。


样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。


【试剂准备】

检测前请将所有的试剂、样本恢复至室温。

如果浓缩的试剂出现结晶,37℃温浴,直至结晶全部溶解。

1×洗液

吸取 20×浓缩洗液 50 ml 1 L 的量筒,加蒸馏水或去离子水至 1000 ml,轻轻混匀,避免泡沫。

转移至干净瓶内。2 - 25℃贮存,1×洗液可稳定 30 天。

1×检测缓冲液

吸取 10×浓缩检测缓冲液 5 ml 100 ml 量筒,加蒸馏水或去离子水至 50 ml,轻轻混匀,避免泡沫。

2 - 8℃贮存,1×检测缓冲液可稳定保存 30 天。

检测抗体

稀释前充分混匀。根据标准品和待测样本的数量,用 1×检测缓冲液按 1100 稀释浓缩的检测抗体。

注意:请在 30 分钟内使用稀释后的检测抗体。

辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素

稀释前充分混匀。

根据标准品和待测样本的数量,用 1×检测缓冲液按 1100 稀释浓缩的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

注意:请在 30 分钟内使用稀释后的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

样本稀释

如果样本需要稀释,请用试剂盒提供的 1×检测缓冲液稀释血清/血浆样本,用细胞培养基稀释细胞培养上清

小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)标准品

用蒸馏水或去离子水重溶小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)标准品,重溶体积标注在小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα) 标准品的标签上。轻柔地涡旋震荡,确保充分混匀,重溶后标准品的浓度为 1000 pg/ml。重溶后静置 10 - 30 分钟。稀释前充分混匀。

请使用聚丙烯管进行标准品稀释。


血清/血浆样本标准曲线的制作:

200μl 浓缩的小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)标准品,加入 200 μl 标准品稀释液,作为标准曲线的最高浓度 (500 pg/ml)。在每一个试管中加入200 μl 标准品稀释液。使用高浓度标准品做 11 系列稀释。每次移液时,请确保充分混匀。以标准品稀释液作为标准曲线的零浓度。

细胞培养上清样本标准曲线的制作:

200μl浓缩的小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)标准品,加入 200 μl 细胞培养基,作为标准曲线的最高浓度 (500 pg/ml)。在每一个试管中加入 200 μl 细胞培养基。使用高浓度标准品做 11 系列稀释。每次移液时,确保充分混匀。以细胞培养基作为标准曲线的零浓度。






1000 pg/ml



【操作程序】

1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品按前面试剂准备中描述的方法配置好,并建议做复孔。

2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

3.加入 350 μl 1×洗液静置浸泡25 秒。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后, 在吸水纸上将微孔板拍干。洗板完成之后,请立即使用微孔板,不要让微孔板干燥。

4.每孔加入 50 μl 1×检测缓冲液。

5.复孔加入 50 μl 2 倍倍比稀释的标准品,空白孔复孔加入 50 μl 标准品稀释液。样本孔加入 50 μl样本。

6.每孔加入 50 μl 稀释的检测抗体。保证步骤 456 连续加样,不要间断。加样过程在 10 分钟内完成。

7.使用封板膜封板。300 /分钟振荡,室温孵育 2 小时。

8.弃掉液体,每孔加入 350 μl 洗液洗板,洗涤 5 次。每次洗板,在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能,必须彻底移除残留液体。

9.每孔加入 100 μl 稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

10.使用新的封板膜封板。300 /分钟振荡,室温孵育 45 分钟。

11.重复步骤 8

12.每孔加入 100 μl 显色底物 TMB,避光,室温孵育 5 - 30 分钟。

13.每孔加入 100 μl 终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀,请轻轻叩击板框,充分混匀。

14.在 15分钟之内,使用酶标仪进行双波长检测,测定 450 nm 最大吸收波长和 570 nm 630 nm 参考波长下的 OD 值。校准后的 OD 值为 450 nm 的测定值减去 570 nm 630 nm 的测定值。仅使用 450 nm 测定会导致 OD 值偏高,并且准确度降低


【检验结果的解释】

计算标准品和样本的平均 OD 值,然后减去零浓度标准品的 OD 值。

检测完成后,以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD值)作为横坐标,利用计算机软件,回归分析确定最佳拟合曲线,创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。

如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的最终浓度


【检验方法的局限性】

1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

5、如果样本值高于标准曲线最高浓度,请用检测缓冲液稀释样本,并重新检测。如果细胞培养上清样本需要较大的稀释倍数,请用细胞培养基进行适度稀释。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素。

7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。


【产品性能指标】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。

2、剂量反应曲线线性

校准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900

3、精密度

批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%

批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%

4、灵敏度

最低检出剂量小于3.2pg/ml

5、回收率

三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在85%-115%之间。

6、特异性

本试剂盒识别天然和重组小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα),与结构类似物无交叉。

稳定性

2℃-8℃保存,有效期6个月。

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。

4、试剂盒中的终止液为酸性溶液,在使用终止液时,请佩戴防护服,及防护眼睛、手及面部的设施。

5、本试剂盒用于科学研究,不能用于诊断治疗。

6、请不要使用其他批号或其他来源的试剂替代本试剂盒中的试剂。


技术要点

1、重溶或者混合蛋白溶液时,避免起泡。

2、加标准品与样本时,每个标准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

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