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笃玛 绵羊Corin蛋白(CRN) ELISA 试剂盒 产品信息

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品牌: DM
货号: DM-Sh45210
包装:
规格: 96T/48T
单价: 1.00元/1
起订: 1 1
供货总量: 1 1
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 中国
有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-09-17 09:41
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产品详细说明
笃玛 绵羊Corin蛋白(CRN) ELISA 试剂盒  产品信息

标本要求
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保
存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20
分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液:
用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检
测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
笃玛 绵羊Corin蛋白(CRN) ELISA 试剂盒  产品信息

Elisa试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法
    1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡至少30分钟。
    2 加样 可能原因: 1)血清或血浆标本分离不好即进行加样; 2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法: 1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样,最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时,请分批操作。
    3 孵育 可能原因: 1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底; 2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法: 1) 贴封片或加盖; 2) 按说明步骤严格控制操作时间。
    4 洗板 可能原因: 1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法: 1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; 2) 合理安排,或多用几台洗板机。
    5 显色 可能原因: 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂; 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法: 1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流; 3) A、B液应避免接触金属器械。
    6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时做好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。
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ELISA 实验步骤:
1.包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC过夜,洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37oC1h,洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔,37oC 30分钟,洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔,37oC 40分钟,洗净。
5.显色:TMB显色
A液:四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液:5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值
 
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