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AAV 肝脏基因表达或敲除技术服务

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品牌: sciencelight
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所在地: 中国 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2016-09-20 13:53
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
 AAV-TBG-Cre/GOI: 一步实现小鼠肝脏特异性基因表达或敲除

 

 

w  最短时间完成——仅需1-2周

w  最高效率保障——高达100%

w  最低成本实现——低于KI/KO

                                                                                                                                       

系统简介:

lAAV-TBG-Cre系统是整合了肝脏特异性TBG启动子和Cre重组酶的腺相关病毒载体。

ØTBG启动子是一种基于人甲状腺结合球蛋白(TBG)启动子和微球蛋白增强子的混合型启动子,用于肝脏特异性转外源基因表达。

ØCre重组酶是在P1噬菌体中发现的一种重组酶,具有催化活性,而且与限制酶相似,能识别特异的DNA序列,即LoxP位点。Cre重组酶作用于同一DNA链上两个同方向的LoxP位点时,可以有效删除两个LoxP位点之间的碱基序列,达到重组靶DNA链的目的。

ØAAV8-TBG-Cre腺相关病毒可高效快速感染小鼠肝脏,目前被认为是最特异的肝实质细胞示踪工具。

l此外,本公司还提供靶基因的病毒定制服务AAV8-TBG-GOI(Gene of Interest),实现外源基因在肝实质细胞中快速特异表达。

产品& 服务:

AAV-TBG-Cre系列

AAV8-TBG-Cre

AAV8-TBG-EGFP-T2A-Cre

AAV8-TBG-mCherry-T2A-WGA-Cre

AAV8-TBG-CreERT2

AAV8-TBG-EGFP-T2A-CreERT2

AAV8-TBG-mCherry-T2A-CreERT2

AAV-TBG-GOI定制

(示例说明)

AAV8-TBG-P53

AAV8-TBG-PTEN

AAV8-TBG-YAP

AAV8-TBG-β-catenin

AAV8-TBG-HNF4α


应用优势:

u  完胜基于白蛋白启动子的肝细胞特异性表达调控

表1.Alb和TBG启动子的文献数据比较

 

Alb-Cre和Alb-CreERT

TBG-Cre

组织/细胞特异性

Alb启动子,在肝实质细胞和前体细胞中均有转录活性。

TBG启动子,仅在成熟的肝实质细胞中有转录活性。

Alb-Cre,由于发育中肝前体细胞中有短时转录活性,其中一部分细胞可分化为胆管上皮细胞,导致部分胆管上皮细胞非特异性表现。

TBG-Cre,只在成熟肝实质细胞中表达Cre,目前被认为是肝细胞特异性敲除的金标准。

Alb-CreERT,除了在肝前体细胞内的短时转录活性外,诱导剂他莫昔芬有一定肝毒性,可引起肝细胞发生胆管反应,降低肝细胞特异性。

 

u  远超慢病毒和腺病毒的超高肝脏感染效率

表2. 三种病毒的参数比较

 

腺相关病毒载体

腺病毒载体

慢病毒载体

病毒参数

无包膜

直径20~30nm

ssDNA病毒

基因组4.6~6kb

无包膜

直径70~90nm

dsDNA病毒

基因组25~45kb

有包膜

直径90~110nm

dsRNA病毒

基因组~9kb

感染整合

不整合到宿主细胞基因组

不整合到宿主细胞基因组

随机整合至宿主细胞基因组

表达稳定性

长时间稳定表达

瞬时表达,不稳定

长时间稳定表达

安全性

低免疫原性

不整合至宿主基因组,不会诱发基因失活或激活癌基因 

高免疫原性

不整合至宿主基因组,不会诱发基因失活或激活癌基因 

低免疫原性

随机整合,可能导致宿主细胞基因失活或癌基因被激活

转染效率 

rAAV8对肝脏感染率可达100%

小鼠肝脏感染率~60%

小鼠肝脏感染效率低。

u  力克基因打靶技术的时间成本和技术难题

表3. AAV肝脏特异性和KO/KI小鼠比较

 

AAV-TBG-GOI

AAV-TBG-Cre

cKO/KI

操作流程

1. 基因载体构建(简单)

2. AAV-TBG-GOI病毒制备

3. 尾静脉注射

4. 开展下游实验研究

1.  通过常规基因打靶技术获得cKI/KO小鼠

2. AAV-TBG-Cre病毒现货

3. 尾静脉注射

4. 开展下游实验研究

1. 基因载体构建(复杂,工作量大)

2. 胚胎干细胞获得

3. 同源重组,筛选阳性胚胎干细胞

4.  移植阳性胚胎干细胞至受体胚胎,得嵌合体小鼠

5. 至少经过两代遗传获得纯合体小鼠

6.  与Alb-Cre或Alb-CreERT小鼠杂交,得杂合小鼠

7. 筛选鉴定,待小鼠成年,开展下游研究

耗时

1个月获得AAV-TBG-GOI病毒,尾静脉注射后1-2周肝脏特异表达,即可开始下游实验。

1-2周即可开始下游实验

从Alb-Cre小鼠和cKI/KO小鼠杂交计算,至少需要2个月。

条件要求

极低,提供基因名称,即可获得病毒

低,有cKI/KO小鼠,直接购买病毒即可

高,必须同时有cKI/KO小鼠和Alb-Cre(ERT)小鼠

可控性

基因导入时间可控,基因表达细胞数量可通过病毒滴度控制

基因敲入/敲除时间可控,基因敲入/敲除细胞数量可通过病毒滴度控制

模型一旦构建,基因敲入/敲除立即生效,所有细胞均一化,无法控制数量和比例。

效果

肝细胞特异性表达外源基因

肝细胞特异性敲入/敲除靶基因

在肝脏敲除/敲入靶基因,特异性差(表1)

成本

 

 

 

 

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