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AFLP 技术服务

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最后更新: 2017-09-29 16:20
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AFLP 技术服务


       AFLP标记技术是1993年由荷兰的Zabeau和Vos博士提出并完善的。现已广泛应用于生物多样性,指纹图谱的构建,遗传图谱的构建,基因克隆等诸多研究领域,显示了广阔的应用前景。AFLP与其他分子标记相比具有:1、DNA 用量少;2、可重复性好;3、多态性强;4、分辨率高;5、样品适用性广,6、对基因组序列信息依赖性低等优点。在物种的多态性分析中获得广泛的应用。AFLP的选择扩增产物目前主要通过两种方法进行分离检测,传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE的方法和自动化程度较高的毛细管凝胶电泳进行检测。

PAGE方法主要是AFLP的选择扩增产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到分离,然后通过银染将条带显现出来,然后通过照相得到相应的图片,优点是引物可以是普通引物,价格相对较低,做少量样本或者大量样本的引物筛选比较合适,另外还可以对差异条带进行克隆测序,获得差异条带的序列信息。

毛细管电泳检测方法的优点是自动化,可以对大量样本进行实验,速度快,后期的条带读取可以依靠软件,降低了人为读取的标准不一。

1AFLP服务内容

1 样本基因组DNA的提取

2 筛选多态性较好的引物(酶切,预扩,选择性扩增)

3-1 在ABI3730xl测序仪上完成数据采集

3-2 或是在JY-CX2B型 测序电泳槽上完成PAGE检测(可以回收差异带)

4 数据分析:和客户详细沟通,确认分析方案:读取01矩阵(PAGE胶读取另外收费);聚类分析;多样性分析;多态位点数(AP)、多态位点百分率(P)、平均等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei′s基因多样性指数(H)、Shannon′s信息指数(I)、遗传分化度(Gst)等。利用NTSYS进行聚类分析。

2目前已经进行的样本类型树木,草,花卉,昆虫,鱼类,虾类,真菌等;

3)客户提供:

★ 基因组DNA:

●至少15μL样品,浓度为50-100ng/μL;

●2%琼脂糖电泳检测有DNA主带,没有降解;

●DNA经过DNA纯化试剂盒或磁珠纯化;

●DNA需溶解在TE或灭菌的去离子水里;

●DNA溶解后,肉眼看不到杂色;

★ 植物材料: 新鲜组织,叶片采用硅胶干燥后或干冰运输;

★ 动物材料: 新鲜组织,无水乙醇封存低温运输;

4)报价体系:

AFLP

按照96个样本进行随机8对引物计算,提供01矩阵;

 

单价(元)

数量

合计

 

DNA提取

30

96

2880

 

纯化

10

96

960

 

引物

300

0

0

FAM标记,其他标记350元

酶切

40

96

3840

 

预扩

10

96

960

 

选择性扩增

5

768

3840

 

毛细管检测

800

8

6400

 

分析

2000

1

2000

 
     

20880

 
         

AFLP

按照50个样本进行随机8对引物计算,提供PAGE胶图

 

单价

数量

合计

 

DNA提取

30

50

1500

 

纯化

10

50

500

 

酶切

40

50

2000

 

预扩

10

50

500

 

选择性扩增

5

400

2000

 

PAGE检测

800

8

6400

 

分析

2000

1

2000

 
     

14900

 

 

                                           AFLP---PAGE检测引物筛选



                              AFLP--毛细管电泳检测

 
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