Edman转膜PVDF步骤

Edman转膜PVDF步骤-详情"Edman降解法（Edman degradation）测序实验中，经过SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜”步骤，从PAGE胶转移到PVDF膜上固定，才能接着使用Edman降解法进行下一步的测序。转膜是将蛋白胶上的样品转移至PVDF膜上，是Edman降解法测序样品准备过程，这是对zuì终的测序结果影响较大的一步，转膜质量的好坏直接决定了测序的数据分析结果。因此，Edman转膜步骤不容忽视。为了防止没有电场的情况下已经分

质谱法和Edman降解法N端测序

质谱法和Edman降解法N端测序-详情"几乎所有蛋白质合成都起始于其N-末端，其氨基酸序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着重要作用，因此蛋白质的N-末端序列分析对于生物医药等研究非常关键。蛋白质N-末端测序的两种主要方法是Edman降解（Edman degradation）和质谱法（Mass spectrometry）。质谱法将蛋白消化成5-25个氨基酸的肽，随即通过LC-MS/MS分析检测，将采集的数据与理论序列数据库进行匹配，进而确认N端序列。质谱可以测出

Edman蛋白N端测序

Edman蛋白N端测序-详情"几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白翻译后在细胞内会发生剪切和修饰，通常不能简单地依据基因序列对蛋白质N-端序列进行预测，而是需要对蛋白质的一级结构直接测定。因此，蛋白质N端测序分析对于生物医药等相关研究有着巨大的影响。Edman降解（Edman degradation）又称Edman测序，基于Edman降解法的蛋白质N-端测序分析是由埃德曼（P.Edman）创立的一种测定蛋白质一级结构氨基酸序列的方法。其涉及循环化

Edman化学降解的原理和反应特点

Edman化学降解的原理和反应特点-详情"Edman降解法（Edman degradation method）是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）shǒu先创立，用于肽链或蛋白质N-末端氨基酸序列分析的常用方法，其反应原理和反应特点如下所述。Edman降解法原理是异硫氰酸苯酯（PITC）在弱碱（TMA）条件下与蛋白质N端的α-氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽（PTC-AA），然后在无水强酸（TFA）条件下，N端的第yī个残基从完整的多肽蛋白链上以2-苯氨基噻唑啉酮（ATZ-AA）的

Edman测序法的主要原理

Edman测序法的主要原理-详情"Edman降解（Edman degradation）是从蛋白质多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程，其通过循环耦联-环化裂解-转化-PTH-氨基酸鉴定这一系列化学反应实现蛋白/多肽N端氨基酸的鉴定，深入了解Edman降解法测序的主要原理对蛋白质有序的氨基酸组成的分析具有指导意义。耦联：即在碱性环境下，Edman试剂苯基异硫氰酸酯（PITC）与蛋白质或多肽链的N末端的α-氨基反应，形成末端残基的苯硫代氨基甲酰基

Edman降解法测序反应条件

Edman降解法测序反应条件-详情"Edman降解（Edman degradation）法即在弱碱性条件下使蛋白质肽链N末端游离α残基与异硫氰酸苯酯（PITC）反应，然后用酸处理，从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲（PTH）衍生物的形态游离出来，然后测序并进行序列分析。Edman降解法测序是通过一次次循环反应完成的，在每一轮的循环步骤中都包含偶联、裂解、转化以及氨基酸识别过程，其反应条件如下所示：偶联条件：以气态形式输送12

Edman测序的局限性

Edman测序的局限性-详情"鉴定蛋白质的zuì准确方法是利用蛋白质测序方法，蛋白质测序的两种主要方法是Edman降解法和质谱法。Edman测序补充了质谱测序技术，并且在测序动物肽（无序列数据库可用）方面优于质谱测序。Edman测序的关键是试剂苯基异硫氰酸酯（PITC），其被称为Edman试剂。蛋白质的N端在未封闭的情况下，在碱性pH下PITC容易与肽的N端α残基相互作用，从而产生苯硫代氨基甲酰氨基酸衍生物。在不破坏被测序的肽中其他残基

如何查找质谱结果中的磷酸化位点

如何查找质谱结果中的磷酸化位点-详情"磷酸化蛋白组的研究内容中，位点分析是zuì重要的一个环节。不同磷酸化位点在生物学进程和分子功能上有不同的生物学意义。由于大多数磷酸化蛋白都有多个磷酸化位点，而且其磷酸化位点是可变的，所以对单一磷酸化蛋白质进行研究的传统方式，例如磷酸化抗体验证的方法显然不能满足磷酸化蛋白组的研究的多样性和复杂性，大分子生物质谱成为磷酸化蛋白鉴定zuì常用的技术手段。如何查找质谱结果中

iTRAQ与Label Free

iTRAQ与Label Free-详情"蛋白质是由氨基酸组成的有机生物大分子，一切生命活动都离不开蛋白质，其在体内的动态变化过程（如种类和含量的变化）揭示了生命活动的变化过程。定量蛋白质组学就是对一个体系内所有蛋白质含量进行精确地鉴定，以揭示某项生命活动的本质。定量蛋白质组学技术可分为标记（iTRAQ等）和非标记（Label Free）两类。iTRAQiTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)是一种基于标签的蛋白质

蛋白质胶条质谱鉴定

蛋白质胶条质谱鉴定-详情蛋白质胶条鉴定蛋白质胶条是蛋白样品经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后所得到的相互分离的蛋白条带。在电场作用下，蛋白质在聚丙烯凝胶中按照分子量大小进行迁移，形成不同的蛋白条带，每一条蛋白条带中的蛋白质可能是相同的也可能是分子量相同或相似的不同蛋白质，可能是已知的也可能是未知的，这些蛋白胶条可以切割下来，对所含的蛋白质做进一步的鉴定，即蛋白质胶条鉴定。蛋白质胶条质

怎么测蛋白磷酸化

怎么测蛋白磷酸化-详情蛋白磷酸化检测shǒu先要明确该蛋白样品是否发生磷酸化修饰，如有磷酸化修饰，那么再分析发生磷酸化的氨基酸位点以及发生磷酸化的肽段含量。目前蛋白质磷酸化分析的方法主要有放射性标记法（32P）、免疫印迹法、荧光染色法和质谱法等。放射性标记法先用32P标记ATP，通过细胞代谢标记到磷酸化蛋白质上，再经一维或二维凝胶电泳或色谱法进行分离，zuì后通过放射自显影进行检测。免疫印迹法基于抗体特异性结合

蛋白质等电点的测定

蛋白质等电点的测定-详情蛋白质表面存在一些酸碱性离子基团，如氨基、羧基、酚基、巯基等，因此蛋白质与氨基酸一样本身带有净电荷。在不同pH的溶液中解离所带的正负电荷不同，在某一pH值的溶液中，其解离的正负电荷相等，这时溶液的pH值就称为蛋白的等电点（isoelectric point, pI）。蛋白质的等电点与其空间结构有关，因此对于某一特定蛋白质来说其等电点也是固定的。当蛋白质处于与其等电点相同pH的溶液中时，在该溶液中的溶解度

蛋白圆二色谱

蛋白圆二色谱-详情圆二色谱（circular dichroism, CD）是基于光活性物质的圆二色性发展起来的一种研究化合物空间结构的分析技术，又称圆二色光谱。蛋白质的不对称空间结构如α-螺旋、β-折叠、β-转角等使其具有圆二色性，是一种典型的光学活性物质，因此可利用圆二色谱对其空间结构进行分析。当使用平面偏振光照射蛋白质时，蛋白质对左右偏振光的吸收度不同，以不同频率的平面偏振光的波长λ作为横坐标，左（εL）、右（εR）偏振

蛋白糖检测

蛋白糖检测-详情蛋白糖是指发生了糖基化修饰的蛋白质，也称糖蛋白。蛋白糖检测主要就是鉴定一个蛋白质是否发生了糖基化修饰。糖蛋白检测可以通过分离富集糖基化蛋白质的技术来实现，如凝集素亲和技术、肼化学富集法以及凝胶色谱技术等。凝集素可以专一性识别并结合某一特异性的单糖或寡糖中特定的糖基序列。含糖蛋白的蛋白质样品或经酶切的聚糖肽可以按照顺序通过多种凝集素亲和色谱柱，从而筛选出不同的聚糖蛋白或聚糖肽，用于后

蛋白糖基化

蛋白糖基化-详情蛋白质糖基化是指短链的碳水化合物残基（寡糖或聚糖）通过糖苷键共价结合在蛋白肽链的特定氨基酸残基的过程。连接在蛋白质上的寡糖或聚糖就称为糖链。由于糖链结构的多样性、复杂性和不均一性，使得蛋白糖基化修饰成为zuì复杂的翻译后修饰方式之一。根据糖基化发生的氨基酸位点以及糖链的种类，可以将糖基化分为N-连接糖基化、O-连接糖基化以及糖基磷脂酰肌醇锚糖三类。蛋白糖基化具有重要的生物学功能，糖基化蛋

差异蛋白分析

差异蛋白分析-详情生物体在生命周期中所表达的蛋白质种类和含量并不是一成不变的，而是受多种因素的影响，如生命周期、外界环境条件和药物等，生物体会表达不同的蛋白质以适应外界环境的变化以及自身生理过程的变化。比较生物体不同生命过程或不同环境下表达的蛋白质的差异就叫做差异蛋白组分析，或比较蛋白质组学。差异蛋白质组学是蛋白组学的一个分支，蛋白组学研究的是一个体系中的所有蛋白质，而差异蛋白质组学旨在寻找和鉴定

蛋白末端测序

蛋白末端测序-详情组成蛋白质的多肽链不是闭合的，而是链状的化合物，含有两个末端，即氨基端（N端）和羧基端（C端）。大量研究表明蛋白质的C端和N端有着不同的重要作用：蛋白质N端序列与蛋白质的寿命和亚细胞器定位等有密切关系；C端序列影响蛋白质和多肽的空间结构和生物功能。对蛋白的末端序列进行研究有利于蛋白质的高级结构分析，从而揭示蛋白质的生物学功能。蛋白质C端测序方法蛋白质C端测序的方法主要有羧肽酶法、化学法和

单抗糖型分析

单抗糖型分析-详情单克隆抗体的本质是一种蛋白质药物，在生产过程中可以对其进行蛋白翻译后修饰来改变其结构和作用疗效，如糖基化修饰。在单克隆抗体的特定氨基酸位点以糖苷键共价结合寡糖或聚糖的过程就称为单克隆抗体糖基化修饰，根据糖基化发生的氨基酸位点可以将其分为N-连接糖基化和O-连接糖基化。单克隆抗体糖型分析就是研究该抗体蛋白在哪个氨基酸位点发生了何种糖基化修饰。糖型结构与单克隆抗体药物的疗效密切相关，是保

蛋白质定性质谱

蛋白质定性质谱-详情蛋白质定性质谱就是利用质谱技术对蛋白质进行定性鉴定，对蛋白质的种类进行识别。质谱鉴定蛋白质的基本原理为经过酶解的肽段在质谱仪中可按照一定的规律解离成不同系列的离子，通过分析不同系列相邻离子的质量差等质谱数据推算氨基酸的质量及序列，进一步分析得到蛋白或多肽的分子质量和结构等信息，从而对蛋白质进行定性鉴定。蛋白质质谱鉴定技术基于肽段中氨基酸序列的特异性对蛋白质进行鉴定，一次性分析蛋

HDX-MS

HDX-MS-详情HDX-MS 氢氘交换质谱（Hydrogen deuterium exchange mass spectrometry, HDX-MS）是一种新型的基于质谱的蛋白质空间结构研究技术。其基本原理是蛋白质表面及内部的氢原子与重水中的氘原子交换速度不同，表面的氢原子与重水密切接触更容易与氘原子发生交换，通过质谱检测确定不同交换速率对应的蛋白质及多肽片段，进而推测蛋白质的空间结构。氢氘交换质谱技术能快速鉴定位于蛋白表面的氨基酸，在蛋白相互作用位点、表位