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放射性标记是一种传统的蛋白质磷酸化检测技术。该方法利用被32P标记的ATP对细胞进行培养，进而使磷酸化蛋白质通过细胞代谢被32P标记上，然后将提取的蛋白样品进行凝胶电泳或色谱分离，最后通过放射自显影进行检测，实现蛋白质磷酸化的鉴定。
该方法检测灵敏度高、结果直观。但由于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸等的磷酸化和去磷酸化代谢速率不同，对某些磷酸化转化速率较低的蛋白质可能检测不到；且存在放射性污染，对环境有一定的危害。
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