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MSC细胞(Mesenchymal Stem Cell,间充质干细胞)是干细胞的一种,具有向多种类型细胞分化的能力,可以分化为神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种细胞。在此介绍MSC细胞成骨诱导实验操作和鉴定间充质干细胞向成骨细胞分化的一个重要方法--茜素红染色的相关实验流程,其原理是间充质干细胞向成骨细胞分化的过程中,在细胞表面沉积钙盐,形成钙结节,钙离子与茜素红螯合,被染成红色或者紫红色。
1、成骨诱导培养基的成分
DMEM基础培养基中,添加10%胎牛血清、1%青链霉素、1%谷氨酰胺、0.2%抗坏血酸、1% β-甘油磷酸钠、0.01%地塞米松,将配好的诱导完全培养基过滤除菌,储存在4℃备用。
2、成骨诱导
1)将无菌的玻片放入细胞培养板中,加入适量的细胞悬液,作细胞爬片;
2)37℃,5% CO2的培养箱中培养,两天换液一次;
3)当细胞达到50~70%汇合后,吸去培养液,加入成骨诱导液;
4)每隔2~3天换液新鲜的成骨诱导完全培养基;
5)根据实验要求,诱导相应时间后,进行茜素红染色。
3、茜素红染色
1)去除诱导培养基,取出细胞爬片至载玻片上,用PBS洗两次,加入4%多聚甲醛固定 30 min;
2)吸去固定液,用PBS洗两次,滴加适量茜素红染3~5 min;
3)去除染色液,用PBS洗两次,干燥、封片,于镜下观察拍照。
4)实验结果如图所示:
