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细胞转染技术详解

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  • 发布时间:2020-12-31产品供应时间:长期有效

所在地:中国河北廊坊市

企业类型:个体经营

公司地址:固安肽谷生物医药产业园A7栋

联系人:石老师 (女士)
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  • 北京百奥思科生物医学技术有限公司
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  • 经营范围:为客户提供整体课题服务,从动物模型细胞模型到分子、蛋白、免疫、病理等各种检测及SCI论文服务。
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细胞转染技术详解

一、细胞传代

1.   试验准备:200 ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。

2.   弃掉培养皿中的培养基,用1 ml的PBS溶液洗涤两次。

3.  用Tip头加入1 ml Trypsin液,消化1分钟(37℃,5%CO)。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

4.   加入1 ml的含血清培养基终止反应。

5.   用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。

6.  将培养液装入离心管中,1 000 rpm离心5 min。

7.   用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

8.  将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。

9.  将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。

二、细胞转染

1.  转染试剂的准备

(1)将400 ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。

(2)震荡后将试剂放在-20℃保存,使用前还需震荡。

2.   选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。

3.  将混合液在室温放置10-15分钟。

4.  吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。

5.  加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6.  到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养基继续培养24-48小时。

三、第二次细胞传代

1.   在转染后24小时,观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

2.   再次进行细胞传代,按照免疫染色合适的密度0.8X105个细胞/35 mm培养皿将细胞重新粉入培养皿中。

3.   在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。

4.  转染条件优化可以参考TransFast的使用说明书。

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