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Western blot结果常见问题分析
蛋白免疫印迹（western blot，即WB），想必做蛋白相关实验的小伙伴们都很熟悉，但是做起实验并没那么容易。每当我们准备好样本，满怀希望自己可以做出这样的实验结果时：
结果却只能得到这样
还有这样，目的条带傻傻分不清
甚至是这样的
面对这些残忍的现实时，我们该怎么抉择？重复一次？换个蛋白？换个抗体？显然这些方案都不是更佳的方案。
为了避免出现以上问题，现在就给大家梳理一下western blot中常见问题以及对应的解决方案。
1、条带形状不好看怎么回事？
可能的原因有：
◐ 凝胶的不均匀或聚合不好，应对策略---灌胶前将溶液充分混匀。
◐ 样本盐浓度较高，应对策略---样本进行除盐或者将样本盐浓度调成一致。
◐ 缓冲液多次使用，导致成分发生变化，应对策略---重新配制。
◐ 凝胶下部有气泡，应对策略---电泳前先赶走气泡。
◐ 电泳时温度过高，应对策略---降低电流或电压。
2、没有条带是怎么回事？
可能的原因有：
◐ 二抗的HRP活性太强，将底物消耗光，应对策略---降低二抗的浓度。
◐ ECL底物中H2O2不稳定，失活，应对策略---更换ECL。
◐ ECL底物没有覆盖到相应的位置，应对策略---重新洗膜之后再次曝光。
◐ 一抗使用不当或者二抗失效，应对策略---在有效期内使用抗体，并对应来源。
3、背景高咋回事呢？
可能原因有：
◐ 洗膜不充分，应对策略---建议增加洗液体积和洗涤次数。
◐ 封闭不彻底，应对策略---提高封闭液的浓度，孵育时间，保证封闭液完全浸没转印膜。
◐ 封闭物使用不当，比如检测生物素标记的蛋白时不可以用脱脂奶粉，应对策略---针对不同的蛋白使用不同的封闭物。
◐ 抗体非特异性结合，应对策略---可以降低抗体的浓度或者减少孵育的时间。
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