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实验技术简介：TUNEL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dU TP 缺口末端标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法.细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡的讯息.TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下,连结核甘酸到DNA的3'-OH处.1992年,以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素,自此衍生出TUNEL此项技术.TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期,即可侦测到DNA片段的产生,并且可以直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置.所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法.
实验操作流程：
1．石蜡切片，常规脱蜡至水; 石蜡切片4um贴在涂有切片粘合剂的载玻片上，58。C烤24h，常规脱蜡至水，二甲苯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 各10分钟，无水乙醇，95%，85%，75%乙醇，各2分钟，水洗2分钟。
2．0.3%H2O2作用 30min,室温，PBS洗3min×3次；
3．Proteinase K 20ug/ml 37℃ 20min
4．PBS洗3min×3次；
5．0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次；
6．PBS洗3min×3次；
7．TUNEL混合液---1ml Tunel缓冲液中加入10ul b-11-DUTP, 10ul TDT, 37C 1h,室温1h
8．PBS洗3min×3次；
9．Streptavidin-HRP 1:400 37C 30min
10．PBS洗3min×3次；
11．0.04%DAB+0.03%H2O2显色10min，流水洗
12．苏木精衬染1min，盐酸乙醇分化，水洗
13．常规树脂封片
实验结果观察：阳性结果为棕黄色（核）或棕褐色，背景呈紫蓝色。
Tunel（原位末端凋亡法）技术服务：
A、实验条件： 切片机(石蜡和冰冻)、Tunel试剂盒
B、交货时间： 15－20天
C、结果提供： 正常和阳性对照玻片及其1张数码照片，剩余石蜡块，检测报告
D、客户提供： 样本
E、样本要求：取材保持组织新鲜（组织块以小于2cm*1.5cm*0.3cm为宜），立即放入固定液（固定液用10%福尔马林液或4%多聚甲醛缓冲液，体积为组织块的10倍以上）中，避免干燥；对于有血迹的样本，可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中；经固定后的样本必须在48小时内处理
实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系嘉美生物。
实验预约热线：400-698-4168 010-58464308 010-58464306
实验预约邮箱：jiamei_bj@126.com info@jiamay.com
中国生命科学实验技术服务、定制高端平台——嘉美生物实验技术中心
嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司。
