末端转移酶 9027-67-2

来源：大肠杆菌细胞，含有编码牛胸腺末端脱氧核苷转移酶的基因
浓度：20u/ul
活性定义：是指在37℃、60分钟内将1nmol脱氧核糖核酸掺入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量
酶活性分析混合物：66mM二甲胂酸钾（PH7.2），1mM CoCL2, 0.01%(v/v) Triton X-100, 10uM oligo(dT)10, 1mM dTTP和0.4MBq/ml[3h]-dTTP
保存液组分：100mM 醋酸钾（PH6.8)、2mM β-巯基乙醇，0.01%(v/v) Triton X-100和50%(v/v)甘油
5×反应缓冲液：1M 二甲胂酸钾、125mM Tris，0.05%(v/v) Triton X-100，5mM CoCL2(PH7.2,25℃)
抑制剂：金属螯合剂、铵、氯化物、碘化物和磷酸盐离子
失活：加入EDTA，70℃加热10分钟
质量保证：测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染
注意：由于含有CoCL2，TdT反应缓冲液不能与下游应用兼容，需采用柱离心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法纯化反应混合物，除去CoCL2
性状：末端转移酶（Terminal transferase, TdT）是一种无需模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3'羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物。一般操作是：先在载体上打开一单个位点，把它与末端转移酶和某一dNTP（如dATP）一起保温以使添尾，另一待插入的外源DNA片段则用互补的用同法添dNTP（dTTP）用同法添尾。接着使上述两种都接上互补单链尾的DNA片段彼此退火，使形成一杂合载体来转化受体菌。杂合载体中的裂隙或切口可被受全菌所修复。