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HEPES是一种两性离子有机化学缓冲剂，二十个Good缓冲剂之一。在无细胞制剂的比较生物学分析中被证明优于传统缓冲液。它具有许多特性，使其非常适合作为组织培养基的缓冲剂，并且不需要特殊的环境即可保持正确的pH值。HEPES不结合二价阳离子，在0°C时可溶至2.25M。注意：由于DpKa /°C为-0.014，因此记录在HEPES缓冲介质中的pH值将随介质温度成反比。
大多数组织培养基被碳酸氢钠和5％CO 2缓冲至生理pH 。因此，在开放的组织培养皿中，在显微镜载物台上的pH将随着CO 2排入大气而在数分钟内迅速增加并离开生理范围。控制pH的一种常用方法是使用不依赖CO 2的介质或添加10–25 mM HEPES以增加缓冲能力。
仅HEPES不能完全控制碳酸氢盐缓冲介质的长期碱化，并且测试更改为其他成像介质或HEPES的添加如何影响所研究的过程也很重要。例如，碳酸氢盐转运蛋白是细胞内pH的主要调节剂 在无碳酸氢盐的培养基或PBS等缓冲液中无法正常运行的动物细胞中。更好但技术上更复杂的方法是控制CO 2浓度，以便可以使用常规组织培养基，这对于长期成像实验而言尤其重要。大多数高端台式培养箱都具有主动CO 2控制选项，其中理想情况下放置在样品附近的传感器可测量CO 2浓度，从而向主动气体混合器提供反馈信号。但是，有源CO 2控制器价格昂贵且并非没有麻烦，并且传感器故障可能会带来错误的安全感。
以上便是Hepes缓冲液用于细胞培养研究的原理，而Hepes缓冲液在其他领域中也有着许多应用，使得市面上的Hepes产品质量不一。这也导致了一些需要高质量的Hepes缓冲液的厂家采购工作比较困难，而大家如若有生物缓冲液的需求可联系我司。
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