     |
病毒载体的纯化过程很复杂。诸如最终产物，病毒质粒，病毒制品的污染以及病毒的感染性对于病毒载体的产量至关重要。所以我们要找到适合病毒载体纯化的生物缓冲剂来解决这些问题。那到底哪些生物缓冲剂比较合适呢？
HEPES
CAS号： 7365-45-9
有用的pH范围： 6.8 – 8.2
HEPES的应用：
用于AAV载体的生产和纯化，用作HEK293T细胞的酸性裂解缓冲液，以中和pH值。为了生产AAV，将其用作HEK293T细胞培养的缓冲液，以维持细胞培养基的pH值。根据实验结果，它显着增加了病毒质粒的释放和病毒的产生。
TRIS
CAS号： 77-86-1
有用的pH范围： 7.2 – 9.0
TRIS的应用：
在慢病毒载体的纯化过程中，由于PBS缓冲液在较低温度下缺乏缓冲能力，并且与Benzonase步骤不相容，因此，TRIS是此处很好的去污剂选择。此外，TRIS还可以避免病毒与AEXc基质结合时的任何pH限制。
在纯化病毒颗粒的过程中，使用通过病毒颗粒生产过程收获的细胞重悬于裂解缓冲液（50 mM Tris，150 mM NaCl，2 mM MgCl2，pH 7.5）中。然后通过三个冻融循环将病毒颗粒从细胞中释放出来。
TRIS-HCL
CAS号： 1185-53-1
有用的pH范围： 7.2 – 9.0
TRIS-HCL的应用：
在使用AAV8载体分析血友病B基因疗法的纯度和基因组完整性以及生物学功效的确定中，将其用作凝胶电泳分析步骤后的培养液。
CHAPS
CAS号： 75621-03-3
CHAPS的应用：
对于蛋白质组学：在用于哺乳动物细胞和组织分析的TMT样品制备中，使用CHAPS裂解缓冲液可以避免蛋白质消化过程中蛋白质的意外降解，并提高蛋白质提取效率。
在加入CHAPS（0.5％w / v）之前，通过在37℃下与苯甲酸酶核酸酶一起孵育来降解剩余的DNA污染。通过离心（3000g，10分钟）从细胞碎片中清除粗裂解物。
CHAPS已成功用于溶解内部膜蛋白和受体，并具有维持蛋白活性的能力。
可以在CHAPS存在的情况下对蛋白质进行碘化。
