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外泌体提取纯化试剂盒（血液）
(Cat.No: UR52136）
产品描述
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于血清、血浆中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
产品组成
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组分名称 |
规格 |
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Blood PureExo Solution*(BPS) |
30 mL |
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Exosomoe Purafication Filter* |
2.0 mL Tube,30 Tubes |
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*RNase/DNase Free, Sterile |
自备材料
1，高速离心机（可以达到10000 g离心力），涡旋振荡器；15 mL离心转子， 2mL离心转子； 15 mL离心管，1.5 mL离心管；
2，1×PBS缓冲液（无菌）；
操作规程
一、样品预处理
1，取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；
2，样品初始用量：（单次提取时的样品量）
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样品名称 |
最低量 |
最高量 |
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血 清 |
0.5 mL |
1.0 mL |
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血 浆 |
0.5 mL |
1.0 mL |
3，离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3000 g离心10 min，去除样品中的细胞碎片；
4，上清液转移：去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中；
5，离心去杂质：转移后的上清液于4℃以10000 g离心20 min，去除样品中杂质，将离心后的上清液转移至新的离心管中。
二、提取外泌体
1，上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中先加入预冷的1×PBS进行稀释，再加入Blood PureExo Solution (BPS)；具体的加入剂量如下：
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样品名称 |
样品剂量 |
先加入1×PBS剂量 |
再加入BPS剂量 |
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血 清 |
1.0 mL |
4.0 mL |
1.0 mL |
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血 浆 |
1.0 mL |
4.0 mL |
1.0 mL |
（注：其他剂量规格请根据表中的试剂用量等比例换算）
2，溶液混合：加入BPS试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于2℃至8℃静置2 h；
3，沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000 g离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒；（注：尽可能吸净上清液）
4，外泌体重悬：取200 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其均匀悬浮在PBS中后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中；（建议PBS液加入体积：初始样本体积=1:5）
5，收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5mL离心管于4℃以12,000 g离心2 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒。
三、纯化外泌体
1， 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入Exosomoe Purafication Filter（EPF柱）上室中，于4℃以3000 g离心10 min，离心后收集EPF柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；
2，外泌体的保存：纯化后的外泌体以50-100 μL进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。
储存条件
本品在室温可稳定保存24个月，使用前请充分混匀。
注意
本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！
更多问题，请联系宇玫博生物技术支持为您做进一步的解答。
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