新生物
客服电话:
当前位置:首页>>供应>>科研试剂>>细胞生物学>>细胞培养试剂>>AdvCell® 免疫细胞无酚红无血清培养基
发布供应信息 让客户快速找到你!

AdvCell® 免疫细胞无酚红无血清培养基

  • 300.00元/瓶
  • 起订量:
  • 供货总量:
  • 发布时间:2015-03-30产品供应时间:长期有效

所在地:中国江苏苏州市

企业类型:个体经营

公司地址:苏州市吴中区吴中大道1368号东太湖科技金融城A423

联系人:凌继栋 (先生)
手机:18114366686
在线联系:
传真:未填写
告诉好友
违规举报
分享拿好礼:
企业信息
  • 苏州佰通生物科技有限公司
  • [VIP会员第10年] 信用度:8级
  • 会员级别:VIP会员 第10年 信用度:8级
  • 店铺等级:VIP
  • 认证类型:
  • 身份认证: [诚信档案]
  • 联系人:凌继栋(先生) 
  • 已缴纳 0.00 元保证金
  • 在线联系:
  • 会员状态:[当前离线] [加为商友] [发送信件]
  • 注册资金:300人民币
  • 企业规模:1-49人
  • 企业类型:个体经营
  • 经营模式:制造商,贸易商
  • 经营范围:生物技术的研发及技术咨询服务;销售:非危险化工产品、化妆品。
  • 产品详情
  • 联系方式

 AdvCell® 免疫细胞无酚红无血清培养基(BICBM0002)的核心是采用无血清替代物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境。产品适用于人及哺乳类动物免疫细胞的培养,包括T、DC﹑CIK、NK等细胞的研究及应用。一方面,鉴于培养基无酚红特性,在细胞培养过程中若需检测光吸收, 可排除酚红的干扰;另一方面,在培养细胞之后获得的上清液可直接用作美容护肤品添加物。通过添加不同的细胞刺激因子,可高效快速扩增相应的免疫细胞。

 

★  产品号   

 Cat No : BICSFM0002

 

★  产品组成

名称

产品号

规格

储藏条件

运输

AdvCell®  免疫细胞无酚红基本培养基

AdvCell® Immune Cell Phenol Red-free base Medium

BICBM0002

500 ml

2-8℃避光

冰袋/常温

AdvCell® 免疫细胞添加物A

AdvCell® Immune Cell Culture Supplement A

BICS0001A

20 ml

-20℃避光

干冰

AdvCell® 免疫细胞添加物B

AdvCell® Immune Cell Culture Supplement B

BICS0001B

1 ml

-20℃避光

干冰

 

★  产品适用范围

    适用于人及哺乳类来源的免疫细胞包括T、DC、CIK、NK 细胞的培养。

 

★  培养条件

    37℃,5% CO2  无菌恒温培养。

 

★  操作步骤

以下过程作为常规免疫细胞无酚红培养的一般准则,如需在生物反应器或培养袋中高密度培养,应优

 化条件来确定最佳的操作步骤,BICSFM0002中各组分(BICBM0002、BICS0001A、BICS0001B)在使用前37℃

 解冻之后混合。

 

T 细胞培养】

1.准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC),或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序,在37℃的水浴,快速

 解冻(〈1 分钟)冻存的外周血单个核细胞。

2.用生理盐水洗涤细胞,根据需要也可加入2-5%热灭活的人自体血浆。

3.用电子(即 Coulter 计数器,VI-细胞)或手动的方法(即血球计数仪)给细胞计数。

4.离心细胞,清除洗涤缓冲液。

5.加入用AdvCell® 免疫细胞无酚红基本培养基(BICBM0002)培养,培养初期,用含细胞因子(如IL-2)的培养基重悬PBMC,CD3+ T 细胞密度保持在大约0.5-1×106/ml,转移细胞到相应的细胞培养容器(培养袋、培养瓶)。随后可应用各种操作激活 T 细胞,包括添加刺激的抗体或抗原呈递细胞。无论培养T 细胞的规模大小,细胞均可被隔离,激活和扩大。

6.在37℃,5%CO2 的潮湿培养箱中培养细胞,给予并维持细胞在对数期生长所需要的营养。为了保持细胞

 在对数期的增长,当细胞密度超过1×106/ml 时,需要分离传代,维持细胞密度在0.5-1×106/ml(例如,

  2×106个细胞/ml 以上,按1:4 比例0.5×106 细胞/ml)。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换,

 建议培养基深度不超过1 到1.2 cm。

 

【单核细胞树突状细胞﹙DC﹚培养】

1.准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC)。

2.将外周血单个核细胞铺在培养瓶中,加入适量 AdvCell® 免疫细胞无酚红基本培养基(BICBM0002)。

3.在37℃,5% CO2 的恒温培养箱中孵育2-3 小时。

4.弃掉含非贴壁细胞的培养基。

5.用生理盐水洗涤贴壁细胞(主要是CD14+单核细胞)三次。

6.添加重组人IL-4 和重组人GM-CSF 到 AdvCell® 免疫细胞无酚红基本培养基(BICBM0002),至终浓度分

 别为50~100 ng/ml 和50 ng/ml,并以此培养基培养贴壁细胞。保持细胞度在1~3×105 细胞/cm2 之间。

 研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。

7.在37℃,5% CO2 的潮湿培养箱中连续孵育5天,建议培养3天左右已添加了IL-4 和GM-CSF 的 AdvCell®

    免疫细胞无酚红基本培养基(BICBM0002)换液,换液过程保留贴壁和不贴壁的所有细胞。

8.培养6天之后,细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记(细胞CD1a、CD80、CD86、HLA-DR)。

9.向 AdvCell® 免疫细胞无酚红基本培养基(BICBM0002)中添加1 ng/ml 的LPS 或者50 ng/ml 的TNF-

 α诱导的树突状细胞的成熟。

 

CIK细胞培养】

1.将采集的外周血收集到2支离心管中,2000 rpm/min离心5 min,弃上清,将沉淀细胞混合,到加生理

 盐水至25 mL,使沉淀细胞充分悬浮。另取1支离心管,加入淋巴细胞分离液20 mL,用滴管将血细胞悬

 液缓慢转移至淋巴细胞分离液的表面,使二者之间形成清晰的界面。

2.2000 rpm/min离心20 min 后,从管底到液面分为4层,依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、

 外周血单个核细胞层(PBMC层)、血浆层。用吸管将PBMC层吸出,转移至另一支离心管中。

3.加生理盐水至40 mL,1500 rpm/min离心5 min,结束后弃上清,将沉淀细胞悬浮,加入生理盐水至40 mL充分混匀后,1500 rpm/min离心5 min。如此共离心洗涤3次。

最后一次离心结束后,弃上清,将沉淀细胞均分为3份,分别转移到3个培养瓶中,各加入40 mL的

疫细胞无酚红基本培养基(BICBM0002)培养,分别记为A1、A2、A3。

5.2h后取出培养的细胞,分别将A1、A2和A3中悬浮的淋巴细胞转移至另3个培养瓶中,分别记为B1、B2、

  B3。3个B瓶中加入IFN-γ,第二天加入IC因子(含有IL-2和抗CD3单抗),诱导培养CIK;3个含有

 贴壁细胞的A瓶中各加入40 mL 的免疫细胞无酚红无血清培养液和H1、Hb因子,诱导培养DC。

6.DC培养过程中,如有发黄,则换液,补加H1和Hb因子。

7.CIK培养过程中,如发现培养液发黄,则换液,换液后补加IL-2。如发现有细胞团块结为不良絮状,则

 用离心管收集后静置沉降5 min左右,待絮状物沉淀后,小心将上清细胞悬液倒回培养瓶中。

8.DC于第7天加入肿瘤抗原和TNF,第8天铲下收集后与相应的CIK混合共培养。DC瓶弃去。如果总的细

 胞量过于庞大,也可将DC和CIK混合后均分到A和B瓶中。

9.共培养的DC-CIK于第10天做微生物检测。

10.细胞悬浮液的制备:培养结束后,将培养瓶中的细胞悬液用离心管收集,1500 rpm/min,5 min离心洗

 涤3次,将25 ml白蛋白加入250 ml盐水中,终浓度1%,加入细胞沉淀,配成细胞悬液。

 

NK细胞培养】

1.抽取患者外周血50 ml,将采集的血样转入50 ml 离心管,2000 rpm离心10 min。

2.离心结束后,用移液器吸取上层淡黄色血清于新的 50 ml 离心管,盖好离心管盖于 40℃水浴锅中孵育

  30 min。

3.孵育结束后,再 1400 rpm(340 g)离心 10 min,吸取上清于新的离心管保存 4℃备用。

4.用移液管将下层的血细胞与生理盐水 1:1 混匀,按 1:1 将悬液缓慢加入装有淋巴细胞分离液的离心管

 (注意:不要打乱液面分界保持液面分层明显)。

5.将离心机的升速与降速调至最低,400 g 离心 30 min;离心结束后,用 5 ml 移液管吸取中间白膜层于

 新的 50 ml 离心管,并用生理盐水洗涤离心两次,以去除多余血细胞。

6.根据计数结果调整细胞浓度,充分混匀后按 1- 2×106/ml 密度接种于含免疫细胞无酚红基本培养基

 (BICBM0002)的培养瓶中,并添加相关NK细胞活化及增殖的相关因子,这些相关因子包括anti-CD3、

  IL-2、IL-4、IL-5、IL-12、IL-15、retronectin。 其中,anti-CD3、IL-2、IL-4、IL-12为必选因子,

 浓度根据具体情况调整。

7.当细胞生长到第三天离心换液 (340 g离心10 min)更换新鲜培养基及相关细胞因子。

8.以后 4-6 天每天镜检观察,根据细胞悬液颜色添加培养液,每次添加应为总体积的三分之一左右。

9.第七天计数,当细胞量大于 6×107 时,则需加入扩增试剂,如细胞数量在 3-6 ×107 时,则长至第八

 天在添加 NK 扩增培养试剂,加液时使总细胞浓度保持在 1-1.5 ×106cell/ml。

10.当培养液体积大于 150 ml 或细胞数量大于 1.5 ×108 时则需转移至培养袋培养(气泡尽量排空,以

   免影响细胞生长)。

11.第 8-11 天每天镜检观察计数,根据细胞悬液颜色加培养液。第 12-14 天观察需加液 时,细胞浓度需

   保持在 2 ×106cell/ml。

12.当细胞达到所需剂量时,即可离心收集细胞待用。

关键词:AdvCell® 免疫细胞无酚红无血清培养基,供应,科研试剂,细胞生物学,细胞培养试剂
反对 0举报 0 收藏 0 评论 0