甲基化分析方法
甲基化分析方法-详情蛋白甲基化是真核和原核生物中常见的翻译后修饰方式,常发生在组蛋白和非组蛋白如转录调控因子、细胞信号通路分子以及肿瘤抑制蛋白等蛋白分子上。甲基化分析的主要任务就是鉴定蛋白是否发生甲基化、发生甲基化的氨基酸位点以及甲基化的水平。目前,蛋白甲基化分析方法主要有高效液相串联质谱法和抗体法。质谱法凭借其高通量、高精度和高准确性等优势已成为当前蛋白甲基化分析的重要工具,大致分析流程是先将待
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2023-09-11 09:30
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蛋白质谱数据比较
蛋白质谱数据比较-详情蛋白质谱数据比较就是将蛋白质谱分析的得到的数据图进行比较分析,可以理解成两种意思:一种是将单个肽段离子的质谱图数据与检索数据库中的理论值进行比较,即对质谱获得的肽离子质量与理论肽质量进行比较和评价,从而实现蛋白肽段的鉴定;另一种可以理解为将不同蛋白组间的肽段离子质谱数据进行比较,以从整体水平分析组间的异同等。百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合n
iTRAQ、TMT、Label-Free
iTRAQ、TMT、Label-Free-详情研究蛋白质含量的技术主要分为标记和非标记两种策略,其中iTRAQ和TMT为体外标记蛋白定量,Label-Free为非标记定量技术。iTRAQ/TMT/Label-Free是三种不同的蛋白定量技术:iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)即同位素标记相对和绝对定量技术。iTRAQ技术通过同位素标记来实现蛋白质定量研究,经水解的蛋白质多肽N末端或赖氨酸侧链基团可以被同位素标记,通过高精度
蛋白质谱生信分析
蛋白质谱生信分析-详情蛋白质谱生信分析就是对质谱数据进行生物信息学分析。所谓质谱数据就是质谱仪通过检测肽段母离子的质荷比(m/z)而得到的图谱,如肽质量指纹图谱(PMF)、肽序列图谱(PST),一般利用各种软件、数据库将质谱获得的肽离子质量与理论肽质量进行比较和评价,从而实现该肽段乃至整个蛋白的鉴定和序列分析。常用的检索工具主要包括PeptIdenet、MS-Fit、ProFound、PeptideSearch、MS-Taq、MS-Seq、PepFrag、Mascot
蛋白质谱结果怎么分析
蛋白质谱结果怎么分析-详情利用质谱仪对蛋白质进行分析鉴定可以得到不同的数据,如一级质谱数据和二级质谱数据,这些质谱数据也就是质谱结果,都需要结合数据库、软件等进行生物信息学分析才能实现蛋白质的鉴定及序列分析等。蛋白质一级质谱数据主要是分析蛋白质酶切产生的肽段质量图谱,即肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprint,PMF),再将PMF中的肽质量数据与数据库中理论肽质量进行比较和评价,从而实现肽段的鉴定。常用
甲基化蛋白质检测
甲基化蛋白质检测-详情甲基化是将活性甲基化合物(如硫代腺苷甲硫氨酸,SAM)的甲基在酶催化作用下共价转移到其他化合物(核酸或蛋白质)的过程。蛋白质的氨基酸残基共价结合甲基基团就称为蛋白质甲基化,发生了甲基化的蛋白质就称为甲基化蛋白质。蛋白质甲基化通常发生在精氨酸或赖氨酸残基上,精氨酸残基可以共价结合1个或2个甲基,即一甲基化精氨酸和二甲基化精氨酸;赖氨酸残基可以共价结合1-3个甲基基团。根据共价结合在氨基
化学交联质谱
化学交联质谱-详情化学交联质谱(Chemical cross-linking coupled with mass spectrometry,CXMS)是利用化学交联剂的交联作用,研究蛋白质或蛋白-蛋白复合体的空间结构以及相互作用的技术。化学交联质谱技术利用带活性基团的化学交联剂,将空间距离在化学交联剂臂长范围内的两个氨基酸通过稳定的共价键(酰胺键)连接起来,再将发生交联后的蛋白质酶切后进行质谱分析,对被交联的氨基酸残基鉴定,实现蛋白质(复合物)三维构象以
互作蛋白组
互作蛋白组-详情蛋白质作为生物体细胞功能的执行者,并不全是“单枪匹马的作战”,一些蛋白需要与其他蛋白质相互结合形成复杂的蛋白复合体才能发挥特定的生物学功能,如血红蛋白、组蛋白等。由于蛋白质相互作用在生命过程中扮演的重要作用,互作蛋白组学应运而生。互作蛋白组学以相互作用的蛋白质组为研究对象,利用组学技术对相互作用的蛋白质进行定性和定量分析、寻找未知的相互作用蛋白,旨在揭示特定生物学过程的分子机制,把
SILAC
SILAC-详情SILAC(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture)是Thermo Fisher公司研发的一种体内标记蛋白质定量技术,即细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记。该技术的基本原理是利用轻型、中型或重型同位素标记的必需氨基酸(如Lys、Arg等)进行细胞培养,使新合成的蛋白质带上同位素标记,提取经不同处理条件后的细胞蛋白并等量混合,通过凝胶或色谱分离、酶解消化后进行串联质谱分析,根据一级质谱和二级质谱数据
谷氨酸蛋白酶 蛋白质质谱分析
谷氨酸蛋白酶 蛋白质质谱分析-详情"蛋白质质谱分析技术可用于蛋白质定性和定量鉴定、蛋白质序列分析以及蛋白质结构预测等。质谱仪只能对离子化形式的物质进行检测,在进行蛋白质质谱分析前,需要将蛋白质酶解为小分子肽段,再利用离子源电离为肽段离子,zuì后利用质谱仪进行检测,所以蛋白酶解是样品制备的关键步骤。蛋白质质谱分析中常用的蛋白水解酶主要有胰蛋白酶(Trypsin)、谷氨酸蛋白酶(Glu-C)、糜蛋白酶(Chymotrypsin
非定量蛋白质组学
非定量蛋白质组学-详情"定量蛋白组学技术根据是否使用标签标记分为标记和非标记两种策略,即标记定量蛋白质组学和非标记定量蛋白质组学。目前还没有非定量蛋白质组学这一说法,可能刚入门的蛋白质组学研究者对这些专业术语不够了解,误把非标记定量蛋白质组学当成非定量蛋白质组学。非标记定量蛋白质组学技术又称为Label Free蛋白质定量技术,其一般的分析流程为将未标记的蛋白样品进行酶解、消化为小分子肽段,再利用串联质谱技术
iTRAQ
iTRAQ-详情"iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)即同位素标记相对和绝对定量技术,是由AB SCIEX公司研发的一种基于标签的蛋白质定量技术。iTRAQ技术通过同位素标记来实现蛋白质定量研究,其基本原理为:将水解得到的蛋白质多肽N末端或赖氨酸侧链基团用同位素试剂标签标记,再将该混合物进行高精度串联质谱分析,根据信号峰强度等质谱信息实现对样品蛋白的定量和定性分析。iTRAQ含有8种不同的试剂标签,
高通量测序
高通量测序-详情"高通量测序技术,又称为二代测序技术(Next Generation Sequencing, NGS)是在一代测序技术上发展而来的新一代测序技术。高通量测序技术克服了一代测序技术通量低、成本高的缺点,使同时分析几十万到几百万条序列成为现实,在大幅度提高通量的同时,保证了测序结果的准确性,降低了测序成本。高通量测序技术的问世使得我们能快速、细致、全面、深入的分析一个物种的基因组和转录组序列,揭开这些遗传物质的神秘面
分泌蛋白的组学检测
分泌蛋白的组学检测-详情"蛋白质是生物体细胞功能的直接执行者,也是保证生命过程正常进行的重要物质。蛋白质在核糖体上合成,经内质网和高尔基体进行加工,成为成熟的、有生物学功能的活性蛋白。蛋白质都是在细胞内合成,但是细胞外也有各种蛋白质,执行不同的生物学功能。所以,蛋白质在细胞内合成后,会被转运到不同的部位发挥其特定的作用。分泌蛋白就是在细胞内合成后,分泌到胞外起作用的蛋白质,如各种消化酶、激素、淋巴因
多肽链氨基酸序列分析
多肽链氨基酸序列分析-详情"多肽是指由三个及以上氨基酸脱水缩合形成的小分子化合物,多肽与蛋白质之间没有明显界限,一般将氨基酸数量小于50或分子质量小于30kDa的称为多肽。蛋白质进行序列分析需要先将其酶解成多肽片段再进行后续操作,因此多肽氨基酸序列分析的方法和原理与蛋白质大同小异,蛋白质测序方法同样适用于多肽,如N端测序、C端测序、从头测序、肽质量图谱测序和基于质谱的序列分析等。百泰派克生物科技使用Thermo公
多肽质谱
多肽质谱-详情"多肽质谱就是利用质谱技术对多肽进行鉴定分析。多肽质谱分析的原理与蛋白质一样,都是通过串联质谱进行定性或定量鉴定。经色谱分离的多肽分子通过离子源进行离子化后,利用质谱仪进行一级和二级质谱检测,根据MS1和MS2数据,如多肽离子质荷比、质谱图等结合生物信息学分析,获取多肽的氨基酸序列信息或翻译后修饰信息,以实现多肽的鉴定和表征。百泰派克生物科技使用Thermo公司zuì新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱
蛋白组学数据如何分析
蛋白组学数据如何分析-详情"蛋白质组学分析中zuì重要也是zuì关键的一步就是对海量的数据进行相关的生物信息学分析,将数据可视化,获取我们研究需要的蛋白质的相关信息。那么蛋白组学数据分析又该从何做起呢?shǒu先,我们需要对获得的蛋白质组学数据进行快速的可视化分析,如主成分分析、相关性分析、火山图分析、韦恩图分析、热图分析以及聚类分析等,先对数据的整体情况进行大致了解,如样品均一性、样品间差异性以及变化趋
蛋白组学如何筛选差异蛋白
蛋白组学如何筛选差异蛋白-详情"差异蛋白筛选是根据蛋白质谱定量数据进行统计推断,从而寻找不同处理条件或不同状态下表达量存在显著差异的蛋白质。目前筛选差异蛋白的方法众多,根据不同的统计学派别可以分为经典的统计学策略、贝叶斯统计学策略和其他策略。经典的统计学策略,根据是否要求实验数据服从某种分布形式,分为基于分布假设的统计策略(如T检验、SAM等)和基于传统的非参数检验策略(如DESeq、Fisher精确检验、G检验等
蛋白组学联合磷酸化
蛋白组学联合磷酸化-详情"磷酸化是一种常见的真核生物蛋白质翻译后修饰,也是生物体zuì重要的修饰调控方式,参与诸多信号转导途径以及细胞代谢进程,如基因表达、转录调控、免疫调节以及细胞增殖、生长、分化、凋亡等,异常的蛋白质磷酸化还会引起一系列疾病。蛋白质组学联合磷酸化就是在组学水平上研究磷酸化修饰,即磷酸化蛋白质组学,主要任务就是解析蛋白质磷酸化位点、水平以及磷蛋白的结构等,以揭示某一具体生命活动与蛋白
非变性质谱
非变性质谱-详情"非变性质谱是相对于变性质谱而言,通常说的质谱技术一般是指变性质谱。变性质谱与非变性质谱在检测对象和zuì终目的两个方面有很大的区别,传统的变性质谱分析需要将蛋白样品进行酶解,再将小分子肽段进行质谱分析,蛋白质的天然结构、共价和非共价结合遭到破坏;而非变性质谱不需要进行样品前处理,可以直接检测完整的蛋白复合体。再者,利用变性质谱进行蛋白分析时主要是对蛋白质进行定性和定量鉴定;非变性质谱
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