糖蛋白糖基化检测

糖蛋白糖基化检测-详情"糖基化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一，生物体中糖链共价结合蛋白质中特殊基团合成糖蛋白。经过糖基化修饰的糖蛋白在细胞识别、细胞间信号传递、细胞迁移中均具有重要作用，糖蛋白糖基化检测是研究生物体生命活动的一个重要方法。目前，糖蛋白糖基化检测通常使用糖蛋白亲和力检测方法、荧光探针方法以及质谱法，随着质谱分辨率的不断提高，基于质谱的糖基化检测技术已得到广泛的应用。在开始质谱检测之前

糖蛋白结构分析

糖蛋白结构分析-详情"糖基化修饰是糖链在糖基转移酶的催化下，与蛋白质侧链氨基酸以糖苷键的形式共价连接，zuì终形成糖蛋白的过程。研究表明，超过50%的真核生物蛋白在经过糖基化修饰后，zuì终以糖蛋白的形式参与生命活动而发挥其作用。解析糖蛋白结构是理解其生理功能的一个重要前提。基于质谱的糖蛋白结构分析可使用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）或亲水作用色谱串联质谱（HILIC-MS/MS）技术来开展。其基本流程为：shǒu先，使

蛋白质质谱鉴定的基本原理

蛋白质质谱鉴定的基本原理-详情"蛋白质是一条或者多条肽链以特殊方式组合而成的生物大分子，大多数蛋白质会自然折叠为一个特定的三维结构。蛋白质鉴定主要就是识别蛋白质的一级结构，即鉴定蛋白质肽链氨基酸的排列、分子量，以及二硫键数目和位置。蛋白质鉴定是蛋白质组学的基础，且对生物研究具有重大研究意义。传统的蛋白质鉴定方法包括蛋白质微量测序和氨基酸组成分析（比如Edman降解法），具有低通量、耗时费力、非自动化、灵

N-糖结构

N-糖结构-详情"糖蛋白是由14个单糖（Glc-3-Man-9-GlcNAc-2）的糖链末端N-乙酰基葡糖胺（GlcNAc）与蛋白质上天冬酰胺（Asn）的酰胺基团以N-糖苷键的形式共价连形成的。共价连接的序列位于CH2结构域的五糖核心区（Fc区）。N-糖的核心结构是五糖核心结构，五糖核心结构聚糖分子是由3个甘露糖（Man）和2个N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）所构成，其具有复杂的“双触角型”五糖分子结构。不同的聚糖分子可构成不同的糖型，且糖链长度、分叉方式

蛋白质谱图鉴定

蛋白质谱图鉴定-详情"蛋白质质谱分析中，样本蛋白经过蛋白酶水解后成肽段，经过一维或者多维的色谱法分离，之后肽段被电离和被碎裂形成特征串联质谱谱图，利用自动数据比对程序，将质谱谱图转变成肽段序列。然后对肽段组装和拼接进行验证，将错误的肽段信息滤除，已经被鉴定的肽段序列用来推断样本中有哪些蛋白，当然一些肽段序列可能出现在不止一个蛋白中，这也会使推断过程更加复杂。在常规的蛋白质谱实验中，蛋白质谱图鉴定可通

N糖修饰发生修饰的位点

N糖修饰发生修饰的位点-详情"N-糖基化修饰发生在肽链的天冬酰胺（Asn）上，是zuì常见的糖基化修饰类型。N-糖结构是由14个单糖的前体链加到Asn残基上形成的，N糖修饰发生修饰的位点是肽链与糖链的结合位点。N-糖基化修饰具有位点特异性，其发生的位点一般在-Asn-X-Ser/Thr或-Asn-X-Cys（稀有）序列上，其中X为除脯氨酸以外的其他任何氨基酸，并且位于CH2结构域的五糖核心区域。相应的，N-糖基转移酶只能特异性识别特定氨基酸基序列

蛋白LC-MS/MS

蛋白LC-MS/MS-详情"液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）就是将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物进行更准确的定量和定性分析。通常情况下，同一细胞/组织的蛋白样品，在不同时间/不同环境条件下蛋白谱的表达也存在不同，可通过蛋白LC-MS/MS分析对其进行表征和详细分析。蛋白LC-MS/MS分析是将蛋白用蛋白酶酶切消化为肽段混合物，这些肽段经高效液相色谱分离，再由串联质谱进行分析鉴定。蛋白LC-MS/MS鉴定步骤：收

蛋白LC-MS分析

蛋白LC-MS分析-详情"目前运用较广泛的识别和量化复杂蛋白质样品的技术通常是液相色谱（LC）和质谱（MS）技术，液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）结合了LC的物理分离能力和MS的质量分析能力，用于样品中蛋白定性定量分析。其中LC技术将多种组分分离，具有高分子特异性和检测灵敏度的MS技术则负责检测分析各组分的结构特征，两种技术联用得到了协同增强。与传统的蛋白鉴定技术相比，LC-MS分析技术具有高通量、快速、灵敏、准确，以及自动

N糖检测

N糖检测-详情"N糖对糖蛋白的结构和功能具有重要作用，N糖检测是解析N-糖基化过程及糖蛋白功能的重要前提之一。由于糖蛋白释放的N糖数量有限，N糖分析一直非常具有挑战性，质谱法由于其高灵敏度和选择性而成为N糖检测分析的重要工具。目前，可使用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS/MS）对N糖结构进行解析，其可用于分析简单或复杂基质中N糖。N糖检测流程：在进行质谱检测之前，需要对样

蛋白质组学LC-MS

蛋白质组学LC-MS-详情"蛋白质组学是指大规模地对蛋白质的表达水平、翻译后修饰、蛋白质相互作用等进行研究。蛋白质组研究不仅可以全景式地揭示生命活动的分子本质，还能阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。近年来，色谱和质谱技术的进步驱动了蛋白质组学的快速增长，逐步实现了“深度覆盖”。液相色谱串联质谱（LC-MS）是蛋白质组学研究中zuì常用到的技术，随着高效液相色谱技术（HPLC）和质谱（MS）技术的发展，基于LC-MS的

N-糖样品制备和分析

N-糖样品制备和分析-详情"在开始基于质谱的N-糖检测之前，需要进行N-糖样品制备和分析，主要包括糖蛋白富集、N-糖释放与标记、N-糖衍生化等内容。糖蛋白富集：由于正常生理情况下糖基化蛋白的丰度较低，因此需要对N-糖基化修饰蛋白（即糖蛋白）进行富集，富集方法主要包括凝集素富集、硼酸亲和富集、亲水色谱HILIC富集和肼化学富集等。其中HILIC富集应用比较多，HILIC富集采用jí性固定相和非jí性流动相的色谱技术，利用糖肽和糖

LC-MS/MS蛋白质组学分析

LC-MS/MS蛋白质组学分析-详情"基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）的蛋白质组学可以揭示定量蛋白质组的状态，从而提供深入了解相关细胞或组织生物化学状态的机会。蛋白质并不是孤立的分子而是具有三维结构的物质，并且协同其他蛋白质分子一起参与调控各种生命活动，它们的空间结构和模块构成与其表达水平同样重要。基于LC-MS/MS的蛋白质组学方法结合生物化学手段，对于研究蛋白质组的结构单位有很大帮助作用。目前，随着高校液相色谱

蛋白N端糖基化

蛋白N端糖基化-详情"蛋白糖基化修饰是糖链分子在糖基转移酶的催化作用下与肽链氨基酸侧链活性基团反应生成糖苷键，从而使糖链连接到蛋白质上。蛋白N端糖基化是将含有14个单糖的糖链（Glc-3-Man-9-GlcNAc-2）与蛋白质上天冬酰胺（Asn）的酰胺基团以N-糖苷键的形式共价连接，从而使糖链由磷酸多萜醇载体上转移至蛋白质上的过程。由于N-糖基转移酶只能识别特定的氨基酸基序Asn-X-Thr/Ser（X可以是除脯氨酸之外任何氨基酸）进行修饰，

无标签LC-MS/MS蛋白质组学分析

无标签LC-MS/MS蛋白质组学分析-详情"随着高效液相分离技术（HPLC）和静电场轨道阱（Orbitrap）质谱技术的发展，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）成为目前蛋白质组学分析的主要技术。基于LC-MS/MS的蛋白质组学技术取得了重大进展，在灵敏度、选择性、重现性、蛋白质覆盖率和成本效益方面的表现越来越好。基于LC-MS/MS的蛋白质组学技术为量化复杂的蛋白质混合物提供了一种高通量的方法，其量化能力比那些基于免疫亲和力的传统量化方法（

蛋白MS

蛋白MS-详情"几十年来，质谱（MS）一直是zuì广泛使用的高通量蛋白分析的“金标准”技术。蛋白MS分析通过将蛋白酶解消化为小分子肽段来进行肽段序列识别，它兼具高扫描速度、高灵敏度和分析复杂混合物的能力，是一种非常适合分析蛋白质的技术。此外，现在有无数基于MS分析的蛋白质组学具有独特的样品制备技术、质量分析器和数据软件的组合。质谱结果的搜库解析是依赖于数据库和统计学计算的，不同搜库引擎的匹配过程和打分模式不尽

组织Co-IP

组织Co-IP-详情"免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白互作的经典方法。在组织Co-IP实验过程中，为了保证足够多的蛋白浓度以维持原本存在的蛋白质互作状态，通常需要准备足够多的动物或者组织样品。且Co-IP的实验条件很难一次成功，常需要反复摸索，尤其当蛋白丰度较低、相互作用力不强、使用不易提取蛋白的组织等情况时

细胞膜蛋白co-ip

细胞膜蛋白co-ip-详情"免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话，那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时，另一个蛋白也会被同时沉淀下来。Co-IP是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用的方法，细胞膜蛋白Co-IP可用于验证细胞膜蛋白之间或者膜蛋白与其他蛋白的相互作用。在膜蛋

体内泛素化实验与免疫共沉淀

体内泛素化实验与免疫共沉淀-详情"蛋白质泛素化，或靶蛋白共价结合泛素，在细胞周期的运转中以及细胞内信号转导通路中发挥了至关重要的作用。泛素介导的信号转导的多样性取决于目标蛋白可以通过多种方式被泛素修饰，在一个或多个位点的单泛素化，和通过几种可能键合的多泛素化。每一个泛素分子有七个可能的赖氨酸残基可用于泛素链的延伸；因此多泛素化的功用取决于泛素链延伸中所用的赖氨酸残基。而这是由特异的泛素结合酶或泛素连

体外下拉实验和免疫共沉淀结合

体外下拉实验和免疫共沉淀结合-详情"体外下拉实验和免疫共沉淀结合使用可作为验证体内外蛋白质间接或直接相互作用的强有力方法，两者都是利用亲和配体来捕获互作蛋白，也可分开单独作为研究蛋白质相互作用的方法。免疫共沉淀实验，即Co-IP实验，是以抗体与抗原之间的专一性作用为基础来研究蛋白质相互作用的经典方法, 也是确定2种蛋白在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。这种方法常用于测定2种目的蛋白是否在体内结合；也可用

体外结合实验与免疫沉淀的区别

体外结合实验与免疫沉淀的区别-详情"蛋白质体外结合实验（即Pull-down实验）和免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是研究蛋白质相互作用的两种方法，两者存在一定区别又可互为验证试验。免疫共沉淀实验（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）与IP实验一样，两者均是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。其原理是：当细胞在非变性条件下裂解时，体内存在的蛋白质利用抗体与抗原之间的亲和性将互作